کلون کردن ژن آنزیم L-آسپاراژیناز Escherichia coli ΙΙ در Bacillus subtilis

Authors

  • برزمینی, بهار دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان
Abstract:

سابقه و هدف: ال-آسپاراژیناز ΙΙ کاربرد موثری در درمان لوسمی لنفوبلاستیک (ALL) دارد. این آنزیم از منابع باکتریایی جدا شده و به صورت تجاری به عنوان داروی ضدسرطان عرضه می شود. سلول های سرطانی برخلاف سلول های نرمال، نیاز شدیدی به ال-آسپاراژین دارند، در صورت به کارگیری ال-آسپاراژیناز  (E.C. 3.5.1.1) ال-آسپاراژین به ال-آسپارتات و آمونیوم تبدیل می شود که در نهایت به تخریب سلول های سرطانی منجر می شود. هدف از این پژوهش، کلون کردن ژن ال-آسپاراژیناز E. coli II در B. subtilis جهت تولید انبوه این آنزیم انجام گرفت. مواد و روش ها: ژن ال-آسپاراژیناز  ansB) II) با روش PCR از E. coli BL21 جدا گردید. قطعه تکثیر یافته و شاتل وکتور بیانی pMR12 توسط آنزیم های HindΙΙΙ، BamHΙ هضم شد. واکنش اتصال بین قطعه PCR و شاتل وکتور بیانی برش خورده با روش استاندارد انجام گرفت. در مرحله بعد، وکتور نوترکیب با روش شوک با CaCl2 سرد بهE. coli JM101 ترانسفورم شد. در نهایت به میزبان B. subtilis با روش شیمیایی انتقال یافت. یافته ها: در این مطالعه، ژن ansB به وسیله PCR از E. coli BL21 جدا و توسط تجزیه و تحلیل آنزیمی محصول PCR تایید گردید و در شاتل وکتور بیانی pMR12 کلون شد. سپس وکتور نوترکیب ابتدا در E. coli کلون گردید و وجود ژن 1047bp با تجزیه و تحلیل آنزیمی و واکنش PCR تایید شد به دنبال آن داخل B. subtilis کلون شد و استخراج پلاسمید انجام گرفت و با باند شاتل وکتور بیانی pMR12 دارای ژن ansB به صورت صحیح، مقایسه و تایید گردید. نتیجه گیری: در این تحقیق با استفاده از شاتل وکتور بیانی pMR12 توانستیم ژن ansB را در B. subtilis کلون کنیم. این مطالعه، اولین گزارش کلونینگ ژن ansB در B. subtilis است.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

کلون کردن ژن آنزیم l-آسپاراژیناز escherichia coli ιι در bacillus subtilis

سابقه و هدف: ال-آسپاراژیناز ιι کاربرد موثری در درمان لوسمی لنفوبلاستیک (all) دارد. این آنزیم از منابع باکتریایی جدا شده و به صورت تجاری به عنوان داروی ضدسرطان عرضه می شود. سلول های سرطانی برخلاف سلول های نرمال، نیاز شدیدی به ال-آسپاراژین دارند، در صورت به کارگیری ال-آسپاراژیناز  (e.c. 3.5.1.1) ال-آسپاراژین به ال-آسپارتات و آمونیوم تبدیل می شود که در نهایت به تخریب سلول های سرطانی منجر می شود. ه...

full text

کلون کردن ژن آنتی ژن ایمنی بخشbacillus anthracis در bacillus subtilis

سابقه و هدف: آنتی ژن ایمنی بخش(pa) (protective antigen) bacillus anthracis به عنوان واکسن سیاه زخم مورد استفاده قرار می گیرد. کلون و بیان ژن pa در سویه های مختلف گزارش شده است که بیش ترین بیان، در b. subtilis تا μg/ml 160 بوده است. هدف از این تحقیق کلون کردن ژن pa در ناقل بیان کننده pwb980 و انتقال آن به b. subtilis سویه wb600 می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه پلاسمید pxo1 از b. anthracis س...

full text

Heterologous Bacillus subtilis-Escherichia coli Gene Fusion

Translational coupling was demonstrated in a gene fusion in which the promoter and the N-terminal region of the Bacillus subtilis subtilisin (aprA) gene were fused to a promoterless Tn9-derived chloramphenicol acetyltransferase (CAT; EC 2.3.1.28) gene. Expression of this gene fusion results in the production of a native-sized CAT product, whereas the Tn9-derived CAT gene is usually not translat...

full text

Translational coupling in Bacillus subtilis of a heterologous Bacillus subtilis-Escherichia coli gene fusion.

Translational coupling was demonstrated in a gene fusion in which the promoter and the N-terminal region of the Bacillus subtilis subtilisin (aprA) gene were fused to a promoterless Tn9-derived chloramphenicol acetyltransferase (CAT; EC 2.3.1.28) gene. Expression of this gene fusion results in the production of a native-sized CAT product, whereas the Tn9-derived CAT gene is usually not translat...

full text

Effect of Microwaves on Escherichia coli and Bacillus subtilis.

Suspensions of Escherichia coli and Bacillus subtilis spores were exposed to conventional thermal and microwave energy at 2,450 MHz. The degrees of inactivation by the different energy sources were compared quantitatively. During the transient heating period by microwave energy, approximately a 6 log cycle reduction in viability was encountered for E. coli. This reduction was nearly identical t...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 4  issue None

pages  61- 66

publication date 2014-12

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023